Appearance of granulated cells in blood films stained by automated aqueous versus methanolic Romanowsky methods

Background: Romanowsky stains are used routinely by veterinary clinical pathology laboratories for cytologic and blood film evaluations. Automated stainers are available for both aqueous and methanolic Romanowsky stains. Mast cell granules and canine distemper virus inclusions are known to stain differently by these 2 methods, but we have noticed differences in the staining characteristics of other granulated cells. Objective: The aim of this study was to investigate and document the variable appearance of basophils and large granular lymphocytes in blood films stained using aqueous and methanolic Romanowsky methods. Methods: Cytologic preparations from 1 canine mast cell tumor and blood films from 8 dogs, 1 cat, 1 rabbit, and 1 ostrich were stained using an automated aqueous stain (Aerospray 7120, with and without a predip fixative) and an automated methanolic stain (Hematek). Staining quality and intensity of the cytoplasmic granules in mast cells, basophils, and large granular lymphocytes was evaluated subjectively. Results: Cytoplasmic granules of mast cells, basophils, and large granular lymphocytes stained poorly or not at all with the automated aqueous stain but stained prominently and were readily identified with the automated methanolic stain. Use of the predip fixative with the Aerospray method improved the visibility of basophil granules but not mast cell granules, and had a variable affect on the visibility of granules in large granular lymphocytes. Conclusion: Clinical pathologists should be aware of the staining methodology used on the slides they evaluate to avoid incorrect interpretation of granulated cell populations.     

大豆种子特异性启动子的克隆及功能分析

【目的】从大豆中克隆得到β-伴球蛋白α亚基基因的启动子序列7αP,并对其进行功能分析。【方法】利用PCR技术从大豆基因组DNA中分离β-伴球蛋白α亚基基因启动子序列7αP,将其与GUS基因融合,构建种子特异性表达载体p7αP-GUS,通过根癌农杆菌介导法转化烟草(Nicotiana tabacum)NC89,对再生植株进行PCR、Southern blot检测和GUS组织化学分析。【结果】序列分析表明,7αP长度为1 382 bp,其中含有多种种子特异性启动子的序列元件,如RY重复序列元件、E-box、SEF1-motif、SEF4-motif(、CA)n、Dc3启动子结合因子和ACGT序列元件及一些诱导物应答元件。转基因植株的PCR和Southern blot结果显示,成功地获得了转基因阳性植株;GUS活性检测表明,仅能在种子中检测到GUS活性,而在根、茎和叶等其他组织中均未检测到GUS活性。【结论】大豆β-伴球蛋白α亚基基因上游1 382 bp片段具有种子特异性启动子功能,7αP为种子特异性启动子。     

应用电镜负染色技术检测嗜水气单胞菌

[目的]为鱼类疾病的诊断提供依据。[方法]从患病或濒死鲤鱼中分离培养优势菌株,制成病原菌悬浮液。应用负染悬滴法,负染漂浮法负染色技术检测鲤鱼嗜水气单胞菌,根据细菌的形态特征及鞭毛形状数量等指标判断菌体。[结果]2种负染色技术制备的嗜水气单胞菌样品在透射电子显微镜下视野清晰、分布均匀,无杂质和聚集现象。鲤鱼嗜水气单胞菌呈杆形,稍弯曲,两端钝圆,菌体一侧有极生单长鞭毛,呈管型,具运动力,与菌毛明显不同。电镜下菌体形态假象呈球样结构。[结论]采用电镜负染色技术检测鲤鱼嗜水气单胞菌可达到满意的效果。     

草鱼食用鱼不同颜色肝脏脂肪肝程度的判断

通过测定草鱼(Ctenopharyngodon idella)食用鱼不同颜色肝脏的水分和粗脂肪含量,并运用冰冻组织切片油红O染色技术对肝细胞进行染色,观察肝细胞脂肪滴的变化,利用Image-pro plus 6.0软件测定其阳性面积率,判断不同颜色肝脏的草鱼食用鱼脂肪肝程度.结果表明:与草鱼正常肝相比,花肝、发白肝和发黄肝的水分含量分别降低6.30%、10.01%和14.17%(P<0.05),粗脂肪含量分别升高198.25%、331.00%和485.59%(P<0.05);参照人肝细胞脂肪变性级别的判断标准,正常肝、花肝、发白肝和发黄肝的级别分别评为1.10±0.30、2.30±0.20、3.40±0.50和4.00±0.20;经Image-pro plus6.0软件分析,花肝、发白肝和发黄肝阳性面积率分别是正常肝的3.92、6.31和7.32倍;以上指标经回归分析得到的回归方程为:肝脏粗脂肪含量(Y)与水分(X):Y=-1.089 9X+82.035 7,R2=0.989(P<0.01);阳性面积率(Y)与粗脂肪含量(X):Y=0.970 2X-0.209 0,R2=0.973(P<0.05);粗脂肪含量...     

大葱的CPD染色与核型分析

[目的]研究大葱的CPD带型,为大葱的染色体识别提供标记,了解大葱染色体DNA序列的分子特征。[方法]采用去壁火焰干燥法制备大葱的根尖细胞有丝分裂染色体,用CPD（PI和DAPI组合）对大葱染色体进行染色,结合常规的染色体测量,对大葱进行核型分析。[结果]CPD染色后,大葱的所有染色体的端点区都显示了红色的CPD带;大葱的核型公式为2n=2x=16=14m＋2st（SAT）。[结论]根据CPD带,可对大葱的染色体进行更加准确的识别;大葱的所有染色体的端点区都含有GC丰富的DNA序列;CPD染色可为葱属植物的物种鉴定、系统分类与进化等方面的研究提供DNA分子方面的证据。     

粗根鸢尾染色体制片技术及核型分析

以粗根鸢尾根尖为试材,研究取样时间、预处理液、解离时间等对其染色体制片的影响,并以此最佳条件进行粗根鸢尾核型分析,为其细胞学研究及开展杂交育种提供参考。结果表明,根尖取样以上午8:00～11:00从田间植株取材为佳;用2 mmol/L 8-羟基喹啉溶液预处理2.5 h,经卡诺固定液固定2 h后,在5 mol/L盐酸常温下解离10 min,卡宝品红溶液染色压片镜检,能取得良好的制片效果;粗根鸢尾的染色体数目为2n=18,核型公式为2n=2x=18=2M+10m+6sm,核型属于2A型。     

油菜热休克蛋白基因HSP81.1启动子的克隆与功能验证

利用温度诱导热休克蛋白启动子控制外源基因表达不但能提高外源基因表达的准确性,而且可以通过减少外源蛋白的积累,提高转基因作物的安全性。本研究从甘蓝型油菜（Brassica napus）基因组中扩增获得热休克蛋白基因启动子,并将其克隆至双元载体pBI121的GUS报告基因上游,构成双元表达载体pBI121 HSP GUS。通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化烟草后获得转基因植株。对T1转基因植株研究表明,外源基因在42℃处理1h开始表达,且即使用同样条件诱导,GUS基因的表达率和表达量在不同生长时期均有差异。在第50d左右的苗期,GUS基因的表达率和表达量高,但随植株老化而逐渐下降。研究显示,利用油菜的热休克蛋白启动子可以达到温度控制烟草基因表达的目的。     

番茄Sly-miR167a启动子的分离及功能分析

利用PCR技术从番茄基因组DNA中扩增了Sly-miR167a转录起始点上游2 134 bp的片段,并将其与GUS基因融合构建植物表达载体,转化番茄,研究番茄Sly-miR167a启动子的时空表达特异性;并利用外源激素处理,研究其对激素的响应特性。启动子序列分析结果表明,Sly-miR167a启动子片段含有启动子调控的保守序列以及生长素、乙烯和赤霉素等响应元件。根据GUS染色结果推测,Sly-miR167a可能在番茄的各个组织中均有表达,并且在叶片、茎、开花前2d、开花当天、果实幼果期、绿熟期和破色期表达强烈。通过外源激素处理后,GUS基因的表达均有显著的上调。说明Sly-miR167a启动子的表达具有时间特异性,并且受外源激素的调控。     

平面干花花材的压制与保存方法研究

为把植物的花、叶、茎、根、果实、种子等制作成平面的干燥花材,将其采集、筛选后,用化学和物理的方法做保色处理,然后用标本夹或微波压花器进行压制,干后取出分装保存。结果表明:科学的压制方法,可以基本保持植物材料本身的色彩。通过植物的活体染色处理,可以增加更多的人工的色彩,为进一步提高压花材料的质量和丰富压花材料的色彩提供理论参考。